大黄鱼肾细胞是用于病毒分离及鱼类病害研究的原代或传代细胞模型。该细胞对虹彩病毒等病原体高度敏感，适用于疫苗研发、病原检测及免疫机制研究。

Name: 大黄鱼肾细胞
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更新时间：2026-03-20

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大黄鱼肾细胞

大黄鱼肾细胞（PCK/YCK/LYCK，Large Yellow Croaker Kidney Cells），分离自健康大黄鱼（Larimichthys crocea）的肾脏组织，经组织块法或酶消化法纯化培养建立的永生性细胞系，包含上皮样（YCK）与成纤维样（PCK、LYCK）两种主流形态，是大黄鱼病毒学、免疫学、毒理学及水产药物研发的核心模式细胞。该细胞贴壁生长，适宜温度25–28℃，遗传背景稳定，支原体检测阴性，易传代、冻存复苏，可用于大黄鱼虹彩病毒、造血器官坏死病毒的分离增殖、抗病du药物筛选、免疫信号通路解析及环境污染物毒理评估。本细胞jin限科研用途，严禁用于临床、食用及其他非科研场景。

细胞培养原理

该细胞体外培养的核心原理是模拟大黄鱼肾脏的生理微环境，提供精准的营养配比、温度、pH与气体条件，维持细胞正常代谢与增殖，同时严格防控细菌、真菌、支原体污染，保障细胞在体外长期稳定生长，适配水产科研与药物开发的各类实验需求，具体原理如下：

1. 营养供给：通过培养基提供细胞生长所需的碳水化合物、氨基酸、维生素、矿物质及生长因子等营养成分，满足细胞代谢、增殖及贴壁生长的需求，部分培养体系可适配细胞增殖放大需求，契合细胞培养鱼肉研究中的细胞扩增技术；

2. 贴壁支持：利用培养瓶、培养皿等耗材的表面亲水性处理，为上皮样细胞提供贴壁生长的载体，模拟体内组织的基质环境，促进细胞黏附、铺展及生长，部分场景可结合可食性微载体技术，优化细胞贴壁与增殖效率；

3. 环境调控：控制培养温度为25-28℃（适配大黄鱼生理特性，区别于哺乳动物细胞培养温度），pH值维持在7.0-7.4，通过CO₂培养箱维持适宜的气体环境（5% CO₂），调节培养基渗透压，模拟大黄鱼体内的生理环境，保障细胞正常生理功能；

4. 污染防控：在培养基中添加适量抗生素（如青mei素-链mei素双抗），抑制细菌、真菌等杂菌污染，同时严格执行无菌操作规范，避免细胞交叉污染，确保细胞培养体系的纯净度，保障实验数据的可靠性；

5. 传代维持：当细胞生长至80%-90%汇合度时，通过胰dan白酶消化使细胞脱离培养载体，分散成单个细胞后，接种至新的培养体系中，继续培养增殖，维持细胞的永生性生长，可实现细胞的大规模扩增，适配细胞培养鱼肉研究中的细胞批量培养需求。

细胞特点

生物学特性稳定：该细胞遗传背景清晰，形态均一（上皮样呈多边形，成纤维样呈梭形），贴壁力强，连续传70代以上仍保持正常形态与功能，染色体众数符合大黄鱼物种特征，无显著变异，适合长期科研与规模化扩增；
培养难度低：对环境耐受度适中，常规M199或L15培养基+10%胎牛血清（FBS）即可满足生长，25–28℃恒温、5% CO₂条件下，3–4天可达80–90%汇合度，传代操作简便，新手易上手；
适用性广：可高效支持大黄鱼虹彩病毒、病毒性出血性败血症病毒的增殖与滴度测定，用于抗病毒化合物的高通量筛选；同时可开展免疫细胞因子表达、氧化应激损伤、重金属/农药毒性评估，也可作为基因转染、蛋白表达的体外平台，覆盖水产病害防控与药物研发的核心场景；
易检测与调控：该细胞形态易观察，可通过显微镜快速判断细胞生长状态，便于实时监测实验进程；同时可通过调节培养条件（如营养成分、温度、生长因子），调控细胞增殖、分化状态，适配不同实验需求，尤其适用于细胞培养鱼肉中的细胞生长调控实验；
兼容性好：该细胞可与多种鱼类细胞共培养，也可适配可食性微载体培养体系，能耐受常用的细胞实验操作（如转染、药物处理、冻存复苏），实验重复性高，保障科研实验的稳定性和可靠性，契合细胞培养鱼肉研究中的多细胞共培养及规模化扩增需求。

适用实验场景

本细胞适用于多种大黄鱼相关的水产科研实验，结合行业技术规范与研究热点，具体适用场景如下（所有操作必须遵循无菌操作与生物安全规范）：

病毒学实验：大黄鱼相关病毒（造血器官坏死病毒、病毒性出血性败血症病毒等）的分离、鉴定、增殖及病毒滴度检测，抗病du药物的筛选与药效评估，为大黄鱼养殖病害防控提供技术支撑；
细胞生物学实验：细胞增殖、分化、凋亡机制研究，细胞信号通路调控实验，细胞黏附、迁移实验，可结合可食性微载体技术开展细胞规模化增殖实验，适配细胞培养鱼肉研究中的细胞扩增环节；
免疫学实验：大黄鱼免疫相关细胞因子（如白细胞介素、干扰素）的检测与表达分析，免疫细胞与本细胞的相互作用研究，为大黄鱼免疫机制研究提供细胞模型；
药物研发实验：大黄鱼专用抗病毒、抗菌药物的筛选，药物对细胞毒性的检测，药物作用机制的初步探究，助力大黄鱼养殖领域的药物研发；
其他：细胞培养鱼肉相关辅助实验，如细胞增殖放大技术优化、可食性微载体适配性检测，以及大黄鱼基因工程、细胞工程等相关基础科研实验，为“未来食品"（如3D打印培育鱼肉）研发提供细胞层面的技术支撑。

储存与注意事项

（一）储存条件

冻存储存：冻存液推荐90%wan全培养基+10% DMSO，梯度降温程序为4℃ 30 min → -20℃ 1 h → -80℃ 过夜 → 转入液氮（-196℃）长期保存；短期可在-80℃存放1–3个月，避免反复冻融；
复苏后储存：细胞复苏后，需立即接种至预热的培养体系中，置于25-28℃、5% CO₂培养箱中培养，24小时内更换一次培养基，去除冻存液残留，确保细胞正常贴壁生长，复苏后细胞建议在1周内完成传代或实验，避免细胞活力下降；
培养基储存：细胞培养基需置于2-8℃冷藏储存，避免冷冻、高温及强光直射，开封后需密封保存，添加抗生素后建议在1周内使用完毕，未添加抗生素的培养基可冷藏保存2-3周，若出现浑浊、沉淀等异常，禁止使用；
运输条件：细胞运输采用干冰低温运输（-70℃以下），运输过程中做好防震、防破损措施，运输时间不超过48小时，接收后立即检查细胞冻存管是否完好，快速转入-80℃冰箱或液氮中储存，若为复苏后运输，需维持25-28℃恒温运输，确保细胞活力。

（二）注意事项

本细胞仅用于科研，严禁用于临床、食用或其他非科研用途，实验过程中需严格遵循无菌操作规范，避免细胞污染及交叉污染，同时遵循科研实验伦理要求，规范处理废弃细胞及培养耗材；
细胞培养前需仔细阅读本说明书，严格按照操作步骤进行细胞复苏、传代、培养及冻存，避免因操作不当导致细胞损伤、活力下降或污染，尤其注意培养温度的控制（严禁低于20℃或高于30℃），适配该细胞的生理特性；
所有培养耗材（培养瓶、离心管、移液器吸头等）需经高压灭菌处理，确保无菌无杂质；培养基使用前需恢复至室温（25-28℃），轻轻摇匀，避免剧烈震荡，添加抗生素时需精准控制用量，防止药物对细胞产生毒性；
细胞复苏：将冻存管快速放入37℃水浴，轻柔摇晃至wan全融化（约1–2 min）；1000 rpm 离心5 min，弃去含DMSO的冻存液；用预热至25–28℃的新鲜培养基重悬细胞，接种至培养瓶，24 h 后更换培养基，降低DMSO对细胞的损伤；
细胞传代时，需待细胞生长至80%-90%汇合度时进行，胰dan白酶消化时间需严格控制（通常为1-2min），显微镜下观察到细胞变圆、脱离培养瓶壁时，立即加入含血清的培养基终止消化，避免过度消化损伤细胞；
培养过程中需定期观察细胞形态及生长状态，若出现细胞形态异常、贴壁能力下降、培养基浑浊等情况，需及时排查是否存在污染（细菌、真菌、支原体等），污染严重时需丢弃细胞，避免扩散；
实验所用的DMSO、胎牛血清等试剂需符合细胞培养级标准，避免使用过期或质量不合格的试剂；实验结束后，废弃细胞、培养基及耗材需经灭菌处理后丢弃，避免生物污染，符合科研实验安全规范；
若细胞活力下降、传代困难或出现异常变异，可排查储存条件、培养环境或试剂质量，针对性优化培养方案，必要时重新复苏冻存细胞，确保实验顺利进行，尤其适配细胞规模化扩增及长期实验需求。