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冷冻细胞操作步骤：

1．收集对数生长期细胞；
2．以25μl台盼蓝溶液稀释25μl细胞悬液；用血球计数板计数并计算细胞存活率（至少应该在90%以上）；
3．细胞悬液在4℃ 条件下200磄离心10分钟；
4．将沉淀的细胞重新悬浮在冷冻液中（大约5?06细胞/0.5 ml 冷冻液）；
5．将细胞悬液加入到冷冻管中，每管0.5 ml；
6．将冷冻管置于-80℃冰箱中；
7．24小时后，将冷冻管移入液氮罐中；
8．在记录本或电脑中记录下每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。

传代方法：
收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。 （一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整 个瓶消毒后放到超菌 台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，仅留下 10ml培养液在瓶内继 续培养。
（二）如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：
1. 弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中， 倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又 将培养瓶倒转大约30 秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分 散，轻敲几下培养 培养瓶，细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml*培养基，吸出，分到新的培养瓶中。1:3~1:6 传代；2~3天1次。