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冷冻细胞操作步骤：

1．收集对数生长期细胞；
2．以25μl台盼蓝溶液稀释25μl细胞悬液；用血球计数板计数并计算细胞存活率（至少应该在90%以上）；
3．细胞悬液在4℃ 条件下200磄离心10分钟；
4．将沉淀的细胞重新悬浮在冷冻液中（大约5?06细胞/0.5 ml 冷冻液）；
5．将细胞悬液加入到冷冻管中，每管0.5 ml；
6．将冷冻管置于-80℃冰箱中；
7．24小时后，将冷冻管移入液氮罐中；
8．在记录本或电脑中记录下每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。

细胞复苏操作步骤：
1．将冷冻管迅速由液氮转入到37℃水浴中，冷冻管的顶部保持在水面以上以避免任何污染，不定时搅拌加速解冻；
2．当细胞*解冻后，用含70%乙醇的纱布擦拭冷冻管消毒；
3．将解冻后细胞转移到含4℃预平衡培养液的试管中；
4．细胞悬液在4℃下200磄离心10分钟；
5．弃上清，将细胞重新悬浮在新鲜培养液中；
6．将细胞转移到细胞培养瓶，CO2孵箱中培养；
7．是用倒置显微镜检查细胞存活率以及细胞密度，如果细胞密度过高，用培养液稀释至适宜浓度。